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生物芯片样品准备须知

发布日期:2012/4/11 12:18:02

  请根据样品类型采用相应的操作:

一) 样品处理

  A. RNA样品不低于4µg总RNA(单张芯片),并提供RNA质量检测图。要求浓度在200ng/µl以上,OD260/OD280的比值在1.9至2.0之间,电泳检测28s的亮度约为18s的两倍。-80℃贮存,干冰运输。
       
B.小RNA样品不低于1µg小RNA(单张芯片)。要求浓度在50ng/µl以上,OD260/OD280的比值在1.9至2.0之间。-80℃贮存,干冰运输。

  C. DNA样品取不低于4µg总DNA(单张芯片),并提供DNA质量检测图。浓度不低于100ng/µl,OD260/OD280的比值在1.8至2.0之间,电泳检测无明显RNA条带,基因组条带清晰、完整、无降解-80℃贮存,干冰运输。

  D 组织样品:取不低于100mg以上的组织样本,活体取材后的组织需用0.9%生理盐水漂洗,以去除血渍和污物,并剔除结缔组织和脂肪组织等非研究所需的组织类型,吸干,样品分割成50 mg左右的小块(组织块越小,保存效果越好),放入1.5 mL或2.0 mL的RNase-free的EP 管中,立即加入3倍体积的Trizol溶液或者加入RNAlater 一类的RNA 组织保存试剂液,氮速冻后用封口膜封口,再将EP 管放置于50 mL离心管中或封口袋中,干冰运输,

  E. 细胞样品:

  a. 贴壁细胞

  1) 贴壁细胞培养或处理结束后,去除培养液,预冷PBS清洗一次;

  2) 按每10 cm2 培养面积加1 mL Trizol试剂的比例加入Trizol试剂摇匀,保证所有细胞接触到Trizol而被充分消化;

  3) 用1 ml枪头反复吹打,并将Trizol细胞悬液转移至RNAase-free 的EP管中,并做好标记;

  4) 放入干冰或-80℃冰箱中保存,干冰运输。

  b. 悬浮细胞

  1) 悬浮细胞培养或药物处理结束后,离心去除培养液;

  2) 所收集的细胞用预冷PBS 缓冲液快速清洗一次,离心除去PBS 缓冲液;

  3) 按照每5×106 个细胞加1 mL Trizol的比例加入Trizol试剂,涡旋振荡使细胞充分悬浮,并做好标记;

  4) 放入干冰或-80℃冰箱中保存,干冰运输。

        F. 血液样品请提供至少2mL血样,并在2小时内处理完毕后加入Trizol,并做好标记。

  1) 全血:用EDTA等抗凝剂处理后的样本,按每200µl全血加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入干冰或者-80℃箱保存,干冰运输。

  2) 血浆:用EDTA等抗凝剂处理后的样本,4℃ 4000rpm离心5分钟,上层为血浆样本,按每200µl血浆样本加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输。

  3) 血清:用非抗凝管收集血样,静置分离上层血清,按每200uL血清加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输。

  注:提供D、E类样品需支付¥60/样品的前期处理费用,F类样品需支付¥200/样品的前期处理费用

二) 样品信息卡

  1) 请仔细填写《生物芯片样品信息卡》,提供样品编号、数量、处理方式等信息。

        2) 如果提供RNA或DNA,请同时提供质量检测相关数据和图片,包括分光光度、电泳胶图或Nanodrop仪器检测数据。

        注:样品信息卡信息应与合同上标记信息相同,否则应该详细列出一一对应表格。

三) 样品包装与标记

  1) 建议使用1.5ml离心管包装样品,并且用封口膜密封。

        2) 并在各样品管上做好清晰的标识。

        a. 最好在管上和管盖都用黑色Marker笔写明样品标识;

        b. 另在标签纸上也写上标识,贴在管壁;

        注:管上的标识要与样品信息卡上的标识完全相同。

四) 样品运输

  RNA样品,DNA样品,细胞样品,组织样品,血液样品均用干冰运输。

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