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PCR样品准备须知

发布日期:2012/3/28 14:35:41

  请根据样品类型采用相应的操作:

一) 样品处理

  A. RNA样品取10µg总RNA,并提供RNA质量检测图。要求浓度在500ng/µl以上,体积在20µl以上,OD260/OD280的比值在1.8至2.0之间,电泳检测28s的亮度约为18s的两倍。-80℃贮存,干冰运输。

  B. 组织样品:请将200mg以上的组织样本,并用冻存管分装为两管,做好标记。-80℃或者液氮贮存,干冰运输。

  C. 血液样品请提供至少2mL血样,并在2小时内处理完毕后加入Trizol,并做好标记。

  1) 全血:采集新鲜血液,建议QIAamp RNA Blood Mini Kit等全血样品RNA提取试剂盒抽提RNA,或者新鲜血液分离白细胞;处理后的样本放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输。

  2) 血浆:用EDTA等抗凝剂处理后的样本,4℃ 4000rpm离心5分钟,上层为血浆样本,按每200µl血浆样本加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输。

  3) 血清:用非抗凝管收集血样,静置分离上层血清,按每200uL血清加入1ml Trizol的比率加入足量Trizol,涡旋摇匀,放入干冰或者-80℃冰箱保存,干冰运输。

  D. 细胞样品:

  a. 贴壁细胞

  1) 贴壁细胞培养或处理结束后,去除培养液,预冷PBS清洗一次;

  2) 按每10 cm2 培养面积加1 mL Trizol试剂的比例加入Trizol试剂摇匀,保证所有细胞接触到Trizol而被充分消化;

  3) 用1 ml枪头反复吹打,并将Trizol细胞悬液转移至RNAase-free 的EP管中,并做好标记;

  4) 放入干冰或-80℃冰箱中保存,干冰运输。

  b. 悬浮细胞

  1) 悬浮细胞培养或药物处理结束后,离心去除培养液;

  2) 所收集的细胞用预冷PBS 缓冲液快速清洗一次,离心除去PBS 缓冲液;

  3) 按照每5×106 个细胞加1 mL Trizol的比例加入Trizol试剂,涡旋振荡使细胞充分悬浮,并做好标记;

  4) 放入干冰或-80℃冰箱中保存,干冰运输。

  注:提供B、C、D类样品需支付¥60/样品的前期处理费用。

二) 样品信息卡

  1) 请仔细填写《PCR样品信息卡》,提供样品编号、数量、处理方式等信息。

        2) 如果提供RNA,请同时提供RNA质量检测相关数据和图片,包括分光光度、电泳胶图或Nanodrop仪器检测数据。

        注:样品信息卡信息应与合同上标记信息相同,否则应该详细列出一一对应表格。

三) 样品包装与标记

  1) 建议使用1.5ml离心管包装样品,并且用封口膜密封。

        2) 并在各样品管上做好清晰的标识。

        a. 最好在管上和管盖都用黑色Marker笔写明样品标识;

        b. 另在标签纸上也写上标识,贴在管壁;

        注:管上的标识要与样品信息卡上的标识完全相同。

四) 样品运输

  1) RNA样品,DNA样品请用干冰运输。

        2) 细胞样品,组织样品,均用干冰运输。

      注:干冰运输时间尽量不要超过72小时

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