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Exosome 送样需知

发布日期:2015/3/3 13:02:22
注意:分离exosome 前的样品不能加入任何RNA 保护剂(如TrizolRNA later
一、送样须知:
1. 血清样品
1)采血后,轻轻将全血滴入洁净的EP 管或者离心管
2) 4度
下静置3~4小时,可见血块析出(也可放置4度冰箱过夜);
3) 5000 rpm、4度离心10min,可见淡黄色血清,取出上清后可再3000rpm4度心10min,以最大程度保证血清质量;
4)
将血清分装,送样前可冻存于-80
℃。
提示:送样量最好4mL 以上
2. 血浆样品(不能用肝素抗凝)
1) 用采血针和抗凝管(含 EDTA)抽取全血,混匀;

2) 4度
下静置 3~4小时(也可放置4度冰箱过夜), 5000 rpm, 4度离心5min,取上清即为血浆;
3) 可将血浆分装,送样前可冻存于-80℃。

提示:送样量最好4mL 以上
3. 细胞上清 需要提前预备的实验材料:去除 exosome 的血清(自己制备或购买);
1) 培养皿的细胞汇合率达到 80%~90%时;

2) 把原有培养基吸掉,加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)进行消化;

3) 细胞变圆后加入等体积的含正常血清培养基终止消化;

4) 用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来;

5) 1100rpm,离心5
分钟;
6)
吸掉上清液,用无 exosome 血清的培养基清洗细胞一次;
7)
1100rpm,离心5分钟;
8) 吸掉上清液,加入无 exosome 血清的培养基,悬浮细胞;

9) 根
据细胞种类把细胞传到几个培养皿中( 收集上清时细胞汇合率为 60%~80%),继续培养;
10) 培养 48h~72h 后,收集细胞上清;

11) 2000 rpm,离心10min,然后10000 rpm, 离心30min, 去除细胞或者细胞碎片,
取上清即可。
提示:送样量最好20mL 以上
4. 尿液
1) 用15 mL 离心管收集尿液;

2) 2500~3000rpm,离心15min,去除细胞,取上清
3) 送样前可冻存于-80℃。
提示:送样量最好10mL以上
血清,血浆,exosome等样品属于特殊样品,提取风险较大,锐博生物不保证提取的成功率
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