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GPCR信号通路分析

G蛋白偶联受体(GPCR)是一个庞大的细胞表面跨膜受体家族,已经发现800多个成员,参与多种生命活动以及内分泌与代谢等多种生理过程,同时,与糖尿病、心脏病、肿瘤、免疫疾病等重要疾病的发生、发展及治疗密切相关。基于GPCR在生理病理过程的重要生物作用,这个蛋白家族目前已经成为最重要的药物作用靶标库。目前市场上对GPCR的筛选方法众多,包括同位素标记法、荧光标记法、抗体标记法等等。其中β-lactamase检测法在高内涵高通量筛选中得到广泛使用。β-lactamase检测法的原理如图所示,细胞稳定表达含有NFAT反应元件或cAMP反应元件的β-内酰胺酶报道基因(bla)。在没有 β-内酰胺酶活性的条件下,409 nm 激发完整 CCF4 分子,香豆素(蓝色)会使荧光共振能量转移至荧光素(绿色),使荧光素发出 520 nm 的绿色荧光信号。如果存在 β-内酰胺酶活性,CCF4会被切割,使两种染料分开并干扰荧光共振能量转移 (FRET),此时如果用 409 nm 的光激发香豆素,产生的将是 447 nm 的蓝色荧光信号。这些荧光信号的变化可用荧光显微镜或高内涵高通量系统观察分析。锐博生物利用高内涵高通量筛选系统结合β-lactamase,检测法可以进行GPCR活性分析和相关药物的筛选。




利用β-lactamase检测法检测Dopamine和Dihydrexidine对D1受体活性的影响



D1受体活化依赖于Dopamine和Dihydrexidine的浓度

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