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靶基因3’UTR载体构建

        锐博生物可提供基于人、小鼠、大鼠基因组的pmiR-RB-Report™靶基因3’UTR质粒载体构建服务,其中人源数百个基因已经构建完成,请点击pmiR-RB-Report™靶基因3’UTR质粒载体产品页面查询,其他基因需定制。

        pmiR-RB-Report™报告基因检测系统专门用来检测miRNA与靶基因是否可能存在调控作用,该报告系统报告荧光(hRluc),其下游构建了靶基因3’UTR区域,通过对该荧光的监测,即可验证miRNA对该靶标是否有调控作用;另有一校正荧光(hluc) 作为稳定内参,用于监测质粒表达效率。

图1 pmiR-RB-Report™质粒图谱简图


1) 由于基因的3’UTR长度不一,一般建议构建长度不超过2.5kb。超过2.5kb长度的载体构建难度较大,价格及构建时间需咨询。

2) 建议构建单位点突变载体以验证靶点作用有效性。突变载体构建主要依据预测的miRNA与靶基因3’UTR的稳定结合区域(即种子区)。通过多个碱基突变导致miRNA与靶基因3’UTR区域的结合能力大大降低,从而判断是否存在miRNA的调控作用。

图2 hsa-miR-520a-3p与h-AKT1 3’UTR区域的结合位点

图3 突变位点通常采用种子区突变方式


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