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miRNA qPCR 检测

       利用多项专利技术,提供不同类型 miRNA qPCR 专业检测服务。
       miRNA表达分析是生物功能研究的基础,是当今生物学研究的热点领域。准确检测细胞或实验动物组织中miRNA的表达可用来帮助研究者更快地切入miRNA的功能研究;在病理组织或血液中的miRNA表 达谱检测有助于分析miRNA与疾病的相关性,为开发miRNA作为疾病诊断及治疗生物标志物,和miRNA为基础的药物开发奠定基础。锐博生物经过不断的探索与努力,完成了针对miRBase数据库中全部人、小鼠、大鼠miRNA的 Bulge-Loop™ miRNA qPCR Primer Set,通过对细胞、组织或血液中的miRNA进行表达检测,得到了非常可靠的结果,现向您提供最优质miRNA实时荧光定量PCR全套技术服务。


1 Bulge-Loop™ miRNA qPCR技术服务项目:

a) 相对定量:以U6 snRNA或5S rRNA为内参,检测样本中相关miRNA的表达量;

b) 绝对定量:以化学合成的miRNA成熟链(MQP-0412)为标准品,做5个梯度点以上的稀释后制作定量标准曲线,通过标准曲线对待检测miRNA进行绝对定量;

c) miRNA芯片数据确认:对芯片所筛选目的miRNA进行qRT-PCR数据验证。


2 Bulge-Loop™ miRNA qPCR技术服务方法及仪器:

用SYBR Green I荧光定量PCR试剂检测;

检测仪器为Bio-Rad CFX96,ABI7300等。


3 Bulge-Loop™ miRNA qPCR技术服务流程:

a) 样品RNA准备

提供样品总RNA,也可提供组织、血液、细胞类样品,但需支付¥60/样品 前期处理费用。

b) RNA质量检测

紫外吸收测定法测定波长260nm和280nm的吸收值,判断RNA样品的浓度,并结合琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量。

c) 逆转录合成cDNA

利用茎凸环引物逆转录合成cDNA链。

d) 实时荧光定量PCR

以合成的cDNA作为模板进行实时定量PCR扩增(每个样品检测三次,同时检测每个样品中U6 snRNA或5S rRNA含量作为内参,以校正上样误差)。

e) 分析结果、提供实验报告

相对定量—分析相对表达参数,提供统计学分析,获得相对表达差异;

绝对定量—依据miRNA标准品制作标准曲线(每条曲线上至少设置5个数据点),以定量样品中的待检测miRNA;

分析实时定量PCR结果,提供实时定量PCR实验数据和扩增曲线,融解曲线,柱状图。


  图1 Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR检测的扩增曲线



  图2 Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR检测的融解曲线



图3 Bulge-Loop™ miRNA qRT-PCR分析5个样品中hsa-miR-122的表达差异



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