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有效siRNA筛选

        序列设计是RNAi实验成功的关键,针对基因不同区域设计siRNA的基因沉默效果不尽相同。锐博生物将为您提供有效siRNA筛选服务,帮您筛选最有效siRNA,加速您的实验进程。


实验案例

        针对p65基因的三对siRNA及阴性对照(锐博生物)以50nM终浓度转染A549细胞(Lipofectamine 2000, Invitrogen),48h后qRT-PCR方法检测p65基因mRNA水平的表达,检测三对siRNA的沉默效果及siRNA转染效率。

 
图1 P65基因引物有效性验证实验


图2 采用荧光转染对照检查该细胞系的siRNA转染效率

图3 采用qPCR方法检测siRNA转染后的P65及ACTB的RNA表达水平



图4 有效siRNA统计效率图


服务流程

a. 针对待筛选基因设计并合成三对siRNA及基因qPCR引物;
b. 进行基因qPCR引物有效性检测;

c. 细胞培养:本公司提供常规肿瘤细胞系如A549、Hela等,其他细胞系需另外提供;

d.  转染3对靶基因siRNA,1对Negative control,1对Positive control,1对 Transfection control;

e. 荧光显微镜检测转染对照的转染效果;

f. 48小时后抽提细胞总RNA,以内参基因作为参照,用qRT-PCR方法检测mRNA水平siRNA沉默效率;

g. 鉴定有效siRNA后(沉默效果>70%),向客户提供筛选实验报告。


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