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miRNA 靶基因预测与验证

  利用miRNA产品及报告基因质粒载体体外验证miRNA潜在靶基因。
       将miRNA mimic与pmiR-RB-Report™报告基因质粒载体共转目的细胞系,通过萤火虫萤光素酶的活性分析,即可获得miRNA对潜在靶基因的调控作用的验证数据。

        pmiR-RB-Report™报告基因质粒载体转录后可形成海肾荧光素酶与靶基因3’UTR区域组合而成的特殊mRNA,如果miRNA mimic能够与包含靶基因3’UTR的mRNA互补结合,则荧光素酶的表达活性也受到显著调控,故通过检测荧光素酶的荧光强度即可定量分析miRNA对靶基因的mRNA调控效果。



    

       由于pmiR-RB-Report™报告基因的3’UTR长度不一,大多数长度为1~2.5kb之间。一般建议构建长度不超过2.5kb,同时建议构建单位点突变载体。

  







       将pmiR-RB-Report™ h-AKT1报告基因质粒载体(1ug)及hsa-miR-146a mimic (50nM)共转A549细胞系,采用双荧光素酶检测试剂盒检测结果表明hsa-miR-146a对AKT1 3’UTR有显著调控作用。



   将pmiR-RB-Report™ h-BCL2报告基因质粒载体(1ug)及hsa-miR-9 mimic (50nM)共转A549细胞系,采用双荧光素酶检测试剂盒检测结果表明hsa-miR-9对BCL2 3’UTR有较明显调控作用。

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